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實時定量PCR技術中常見問題匯總

實時定量PCR技術中常見問題匯總實時定量PCR技術（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過特定數(shù)學原理對未知模板進行定量分析的方法。它是一項臨床上非常成熟的技術，目前在分子生物學領域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標準”——核酸檢測就是通過qPCR原理進行的。那么拿到一個樣本，需要經(jīng)過以下多項操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中...

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使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產(chǎn)生技術

使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產(chǎn)生技術使用傳統(tǒng)體外方法生產(chǎn)的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時間的方式同時培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續(xù)生產(chǎn)大量用于下游實驗的EV。一、生物反應器接種、適應和維護培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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細胞培養(yǎng)常見問題匯總

細胞培養(yǎng)常見問題匯總1冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后...

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層析工藝放大需要遵循的原則

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數(shù)和洗脫樣品CV數(shù)，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實際的應用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設備供應商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當層析柱直...

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熒光定量PCR實驗中PCR儀器選購技巧

聚合酶鏈反應(PCR)技術是無數(shù)研究和測試實驗室的主要技術，涉及的領域包括生物醫(yī)學、基因編輯、食品微生物學測試等。熒光定量PCR技術使用熱循環(huán)來促進一系列反應，在這些反應中，DNA樣本會快速、呈指數(shù)地復制，從而產(chǎn)生數(shù)百萬或數(shù)十億個序列拷貝。購買PCR儀器時，重要的是要考慮您的應用的最終目標、熱循環(huán)設備的準確性和效率以及儀器的容量和靈活性。本文概述了PCR儀器可用的不同選項和功能，以幫助您選購合適的PCR儀。1.PCR與qPCR與dPCR雖然所有PCR系統(tǒng)都使用聚合酶鏈式反應復...

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